赵宏艳，胡明华，从仁怀，肖凌云，刘梅洁，鞠大宏△
(1. 中国中医科学院 医学实验中心，北京 100700； 2. 中国中医科学院 中医基础理论研究所，北京 100700； 3. 无限极(中国)有限公司，广州 510627)
痰浊是津液代谢异常的病理产物，任何与津液相关的疾病原因都有可能导致痰浊证的产生，因此痰浊不仅是病理产物还是致病因素。《类证治裁·痰饮》云[1]：“饮惟停蓄肠胃，而痰则随气升降，遍身皆到。在肺则咳，在胃则呕，在心则悸，在头则眩，在背则冷，在胸则痞，在胁则胀，在肠则泻，在经络则肿，在四肢则痹。”因此又有“百病皆生于痰”的说法，历代医家也都非常重视对“痰”的研究，并不断 对其开展理论研究、临床研究及实验研究。基于先前的研究成果及对痰浊的理解，本文阐述了可应用于痰浊研究的动物模型，以期对阐明“痰浊”的现代科学内涵提供借鉴。
1 脾虚证动物模型痰浊的产生与五脏有着密切的关系，其中以脾、肺、肾三脏为要。中医理论认为，“脾为生痰之源、肺为储痰之器”，脾失健运，转输无权，上不能升输及肺以通调水道，下不能降归助肾以蒸发开合，从而导致津液输布与排泄的失常。因此，脾是痰浊产生的关键所在，脾虚则痰生，脾健则痰消，所以脾虚动物模型应可用于痰浊的研究。目前多采用大鼠制作脾虚动物模型，常用的方法有泻下法(大黄或番泻叶等灌胃制作)、饥饱失常法、过食肥甘法、劳倦法、利血平法和复合法等[2-3]。该模型一般状况可表现出便溏、肛门污秽、精神萎靡、倦怠、活动减少、蜷缩、四肢无力、毛发欠光泽疏松、进食不积极等症状[4]。此外，巴马小型猪也可制作出稳定的脾虚痰浊证[5]。脾虚证动物模型除通过一般状况的观察外，还可通过外周血中D-木糖/胃泌素/抗利尿激素的水平、胃和回肠黏膜厚度及水通道蛋白3水平等判断脾虚程度[6-7]。因此，通过对脾虚模型的研究，可从中医理论的角度间接的对痰浊开展研究。
2 痰浊阻肺证动物模型肺的功能与肺中之气、津等物质代谢密切相关，肺失宣降可产生痰浊并滞留其中。1996年王九林等[8]就开始尝试采用硫磺粉撒布于清艾条中烟熏及氨水刺激大鼠的方法，制作肺虚痰阻证动物模型以探讨痰证。目前痰浊阻肺证动物模型常采用化学物质刺激呼吸系统的方法[9-10]，具体方法是将二氧化硫、氨、丙烯醛、硫酸、枸橼酸、辣椒素等刺激性化学物质，气雾吸入或直接注入呼吸道内；也有将肥皂粉、淀粉或滑石粉直接吹入呼吸道内的方法，咳嗽是该模型的主要症状。 除此之外，还可通过观察呼吸道黏液分泌、肺功能指标、气道炎症因子的变化等方法判断痰浊阻肺证的程度[11-12]，因此痰浊阻肺动物模型可用于痰浊证的研究。
3 肥胖和高脂血症动物模型《临证指南医案》指出痰乃饮食所化[13]。饮食不节，嗜食肥甘，损伤脾胃，运化失常，聚湿为痰。《丹溪手镜》中也多次提到“肥人多湿痰”[14]，可见肥胖和高脂血症符合中医痰浊致病。目前常采用高油、高脂等肥甘厚腻食物喂养的方法制作肥胖和高脂血症动物模型[15-16]，这两类动物模型典型症状与临床表现相似，即肥胖、腹部松软、血脂升高。这些过多的脂肪组织和血中膏脂之病理状态即是痰浊。因此，通过高油、高脂喂养建立的肥胖模型和高脂血症动物模型也是较为常用的痰浊证模型。
4 脂肪肝动物模型脂肪肝属于中医“肥胖、痰饮、积聚、胁痛”等范畴。《血证论·脏腑病机论》[17]云：“木之性主于疏泄，食气入胃，全赖肝木之气以疏泄之，而水谷乃化”，说明肝主疏泄功能与水谷运化的关系。肝失疏泄，可致脾失健运、痰浊郁结、阻滞肝脏脉络而形成脂肪肝，这是本病发生的机制。目前脂肪肝动物模型多采用高脂饲料诱发、高淀粉诱发和先天性遗传性脂肪肝3 种模型，这些模型动物可见有不同程度的肥胖、血脂(TC、TG、LDL-C、FFA 显着升高，HDL-C显着降低)和肝功能(AST、ALT 升高)异常及肝细胞脂肪变性，有的模型血糖和转氨酶也会增高[18-19]。这些病变的产生均可与痰浊密切相关，因此脂肪肝动物模型可用于痰浊证的研究。
5 缺血性中风动物模型《明医杂着》说道：“所以古人论中风偏枯、麻木、酸痛、不举诸症，以血虚、死血、痰饮为言，是论论其致病根源。此血病、痰病为本，而外邪为标。[21]”朱丹溪则直接指出：“中风大率主血虚有痰，治痰为先，次养血行血。半身不遂，大率多痰。[22]”现代研究亦认为，痰浊是形成缺血性中风病的主要致病因素以及病理性产物[20]。目前，该病动物模型制作方法有结扎颈总动脉法、自身血凝栓子栓塞颈总动脉的脑梗塞法和电凝法等[23-24]。造模后模型动物可出现与中风患者相类似的临床表现，主要表现有体质量减轻、精神倦怠、少动、向一侧倾斜、下肢外展内收困难、跛足现象等。该疾病模型血液中血液黏度增高、血小板聚集性增高、脂类含量常升高，这是痰浊证的重要生化基础[23-24]，所以缺血性中风动物模型可用于痰浊证的研究。
6 多囊卵巢综合征动物模型多囊卵巢综合征是一种内分泌紊乱性疾病，主要临床表现为肥胖、月经不调、不孕等。中医古籍中也有类似此疾病的症状、病因及治疗的记载。如《丹溪心法》指出:“若是肥盛妇人,禀受甚厚,恣于酒食之人,经水不调,不能成胎,谓之躯脂满溢,闭塞子宫,宜行湿燥痰,用星、夏、苍术、台芎、防风、羌活、滑石，或用导痰汤之类。[25]”《女科切要》也指出，痰闭子宫是经准而不孕的原因之一[26]。目前该疾病主要有3种造模方法，分别是雄激素(睾酮、脱氢表雄酮、双氢睾酮)诱导的模型、雌激素与来曲唑诱导的模型、基因敲除小鼠和转基因小鼠的模型，这些模型动物最主要的病理改变是出现卵巢多囊[27-28]。肥胖和卵巢多囊化病理改变的本质即是痰浊，因此多囊卵巢综合征动物模型可用于痰浊证的研究。
7 围绝经期综合征动物模型围绝经期综合征是妇女在绝经前后由于卵巢功能衰退的内分泌变化所引起的一系列躯体和精神心理症状。目前该模型有3种制作方法，即去势造模、 X线损伤术造模和自然围绝经期造模[29]。去势造模动物模型分为双侧卵巢全切和一侧卵巢全切、另一侧切除80%的方法。卵巢切除手术后第3～5天起，对大鼠进行阴道涂片检查，每天1次，连续5 d，若无动情期反应表明造模成功。X线损伤术造模是通过X光照射破坏卵巢所致症状来反映围绝经期的主要临床表现。自然衰老的围绝经期大鼠，选择11～14月龄大鼠，每天同一时间进行阴道脱落细胞涂片，连续观察15 d，筛选出无动情期变化者作为自然衰老的围绝经期大鼠。这些方法制备围绝经期综合征动物模型，可以出现雌激素水平下降、子官质量降低、体质量增加、甘油三醋和胆固醇含量升高等临床表现，与临床表现相似。这些改变与痰浊致病密切相关，所以围绝经期综合征可用于痰浊证候的研究。
8 绝经后骨质疏松症动物模型绝经后骨质疏松症属于中医 “骨痿”“骨痹”范畴，肾精不足是其主要病变机制。《景岳全书》指出：“五脏之病，虽俱能生痰，然无不由乎脾肾。盖脾主湿，湿动则为痰；肾主水，水泛亦为痰。故痰之化无不在脾，而痰之本无不在肾。[30]”该疾病模型可采用切除动物双侧卵巢的方法制作，一般3个月后即可成模。本课题组实验结果显示，动物在切除卵巢后，体型明显肥胖，骨密度降低，显微镜下可见骨髓腔扩大、脂肪细胞明显增多、骨小梁变细变少、分布稀疏、排列不整齐等，说明该模型出现脂质代谢异常[31]。现代医学也揭示绝经后骨质疏松症与脂代谢紊乱具有显着相关性[32]，所以绝经后骨质疏松症模型可用于痰浊证的研究。
9 糖尿病动物模型糖尿病是1组以慢性高血糖为特征的代谢性疾病，临床多表现为口渴、多饮、多食、多尿、消瘦等。该病有多种造模方法，目前主要分为实验性、自发性和转基因糖尿病动物模型[33]。传统的实验性糖尿病动物模型，如化学损伤法、手术切除胰腺法等都能出现显着的血糖升高，但高胰岛素血症和胰岛素抵抗等都糖尿病特征却不能表现出来。因此，近年来自发性和转基因糖尿病动物模型得到了广泛的应用[34-35]。《内经》指出，“过食膏粱厚味，日久损伤脾胃，脾失健运，水谷精微运化失常，聚湿成痰”。进一步发展，积热内蕴，伤津耗液，津液亏虚，不能上承于口，发为“消渴”[36]。可见，痰浊是糖尿病的主要致病因素之一，因此糖尿病动物模型可以用于痰浊证的研究。
10 肿瘤动物模型症瘕积聚是痰浊形成的必然结果，《黄帝内经》中也早有徵瘕、积聚等病名。《丹溪心法》云：“凡人身上中下有块者多是痰。[37]”近年来，许多医家将痰证理论应用到肿瘤的基础研究和临床实践中，并取得了一定成绩，也为中医从痰论治肿瘤提供了良好的理论指导与临床方法[38-39]，因此肿瘤疾病相关模型可以用于痰浊证的研究。但肿瘤动物模型造模方法多种多样、种类繁多，在此不再赘述。
11 动脉粥样硬化及冠心病动物模型的研究(痰瘀互结动物模型)动脉粥样硬化是以大动脉内膜的脂质沉积、血管平滑肌细胞和结缔组织增生、内膜纤维性增厚及粥样斑块形成为主要特征，最后可导致动脉壁增厚变硬失去弹性和管腔狭窄。中医理论认为，动脉粥样硬化斑块是由于痰浊凝结形成固定不移的有形斑块，滞于血中而导致管腔的狭窄[40]。临床对于动脉粥样硬化主要从“瘀血”角度进行辨证论治。但是瘀本于血，痰本于津，津血同源，因此又导致痰瘀在病理上不可分割的关系-同源而互衍[41]。现代研究亦显示，痰证血液流变性显着异常，主要表现为血液浓稠性、黏滞性、聚集性和凝固性增高[42]，因此痰瘀是痰浊的进一步发展。
目前国内外较为常用制作动脉粥样硬化模型的实验动物是鼠类、家兔及猪，但鼠类最为常用。常用于制作动脉粥样硬化模型的鼠类有小鼠和大鼠，小鼠动脉粥样硬化模型有诱发型和基因工程型2种，而其中ApoE 基因敲除小鼠在我国使用最为广泛。 我国学者对该模型小鼠血脂代谢特点、动脉硬化斑块特性、形成机制、模型制备等多方面进行了大量研究[43]。大鼠有抗动脉粥样硬化特性，但由于大鼠具有经济效益比高、食 性与人相近、血容量和血管管径均明显增加等优点，因此仍是较为理想的动脉粥样硬化动物模型，目前常采用机械损伤动脉及免疫刺激法制备[44]。此外，小型猪和家兔也广泛应用于模型的制作，其中巴马小型猪是国内小型猪应用最多的品种，高脂高胆固醇饲养法和高脂饲料加球囊拉伤法是这两类动物常用的制作方法。采用以上方法造模后，可见到以下不同程度的病理特征，如内中膜增厚、泡沫细胞生成、纤维帽形成等。根据该疾病的病位及典型病理特征，说明其与中医痰瘀互结证密切相关，因此该疾病模型可用于痰瘀互结证的研究。
冠心病是动脉粥样硬化导致器官病变的最常见类型，该疾病模型的制作方法可分为慢性模型和急性模型，慢性模型的制作方法主要有单纯高脂饮食法、高脂饮食联合药物法(常采用注射脑垂体后叶素、麦角新碱、异丙肾上腺素等药物诱发心肌缺血)、高脂饮食联合冠脉结扎法、导管介入法、冠脉压迫法，急性模型的制作方法有冠脉结扎法、药物诱导法(常用的药物有脑垂体后叶素和异丙肾上腺素)和介入栓塞法。 通过体质量、生化指标(血脂、血浆同型半胱氨酸-Hcy、肿瘤坏死因子、心肌标记物、炎症相关因子)、血液流变学、冠脉造影等指标可评价模型的制备以及药物的治疗效果[45]。冠心病属于中医胸痹、真心痛范畴，分为多种证型，其中心血瘀阻证、痰浊内阻证是冠心病中医辨证中最常见的证型[46]。通过实验研究也发现，痰瘀互结是冠心病诱发的最重要因素，其病理表现主要体现在血脂代谢紊乱方面[47]，因此冠心病动物模型也可用于痰瘀互结证的研究。
总的来说，痰浊是人体津液不归正化而形成的病理产物，是脏腑参与、气机变化和精血津液转变综合作用的结果。目前关于痰浊证的实验研究取得了一定的成果，但痰浊证界域宽阔，内容复杂，很多因素可导致痰浊证的发生。痰浊反过来也可导致多种疾病的发生，且痰浊证形成时多可见兼证形成，所以导致痰浊证动物模型仍很难有统一的制作标准。基于笔者的理解，本文对可用于痰浊研究的动物模型进行探析，希望对开展痰浊研究有所启示。
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析其原因，切不可操之过急，若多种西医治疗手段不效，可适时寻求中医药治疗。
中药具有“多角度-多环节-多靶点”的特点，将滋阴补阳方序贯与IVF-ET相结合，实际是中医以人为本的整体观念与西医助孕技术的结合。中药序贯治疗对辅助生殖技术起到的作用，是从宏观总体协调机体内分泌环境，与西医学的助孕技术微观治疗相辅相成。中医药通过调整月经周期、平衡阴阳、调理气血、改善体质状态，渗透在辅助生殖的各个环节，在辅助生殖技术的领地与西医相协而行，一则充实自身，二则辅助他人，共同促进人类的生殖健康与进步[4-5]。
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